反相色譜是迄今在高效液相色譜中應用*泛的技術(shù)，主要是因為它適用于分析絕大多數的非極性物質(zhì)和很多的可離子化的及離子化合物。如果污染是因為重復進(jìn)樣時(shí)強保留物質(zhì)的累積引起的，利用簡(jiǎn)單的清洗步驟來(lái)除去這些污染物往往就能恢復其色譜性能。經(jīng)過(guò)等度運行后的高效液相色譜柱，有時(shí)用90～100%含量的溶劑B(雙溶劑反相系統中洗脫能力較強的溶劑，如甲醇、乙晴、四氫呋喃等)沖洗20個(gè)柱體積可以清除污染物(色譜柱的柱體積和空柱管體積概念不同，一根4.6x250mm柱子的柱體積只有2.5ml，2.1x...

液相色譜柱是液相色譜分離能力的核心部分，其化學(xué)性質(zhì)參數包括以下幾個(gè)方面：1、硅膠基質(zhì)硅膠基質(zhì)是通用的基質(zhì)，強度大，化學(xué)修飾容易，但使用的pH值范圍有限(一般為2—8，特殊修飾的可以達到1—12)。2、聚合物基質(zhì)聚合物基質(zhì)多為聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂，化學(xué)穩定，應用pH范圍寬，具有更強的疏水性，對蛋白質(zhì)等樣品分離效果較好;但強度較小，有機溶劑可能導致聚合物溶脹而受損，批次重復性較差，商品化色譜柱不多，一般價(jià)格較貴。3、載碳量載碳量是基質(zhì)表面鍵合相的比例，載碳量高，則...

離子色譜柱是一種用來(lái)改善在反相色譜中保留較差的強極性物質(zhì)保留行為的色譜技術(shù)。它通過(guò)采用強極性固定性，并且結合高比例有機相/低比例水相組成的流動(dòng)相來(lái)實(shí)現這一目的。而這樣的流動(dòng)相組成尤其有利于提高電噴霧離子化質(zhì)譜的靈敏度。離子色譜柱的分離機制：分離機理在目前還存在著(zhù)爭議，主要包括以下三個(gè)方面：(1)分配機理(2)離子交換(3)偶極-偶極相互作用。更多的試驗現象則表明HILIC色譜柱的保留機理包含氫鍵作用、偶極作用和靜電作用等多種次級效應，很難將其區分開(kāi)來(lái)。影響離子色譜柱保留的主要...

色譜柱在使用前，最好進(jìn)行柱的性能測試，并將結果保存起來(lái)，作為今后評價(jià)柱性能變化的參考。在做柱性能測試時(shí)要按照色譜柱出廠(chǎng)報告中的條件進(jìn)行，只有這樣，測得的結果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同。樣品的前處理過(guò)程：(1)最好使用流動(dòng)相溶解樣品。(2)使用預處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。(3)使用0.45μm或0.22μm的過(guò)濾膜過(guò)濾除去微粒雜質(zhì)。實(shí)際使用中，液相色譜柱有可能會(huì )失效，常見(jiàn)的原因有：1、色譜柱...

使用高效液相色譜柱做HPLC分析時(shí)，通常會(huì )遇到色譜柱柱壓過(guò)高等情況，色譜柱柱壓過(guò)高原因何在?怎么解決呢?高效液相色譜柱柱壓高原因與解決方法：色譜柱柱壓過(guò)高是HPLC柱用戶(hù)最常碰到的問(wèn)題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問(wèn)題，您可按下面步驟檢查問(wèn)題的起因：1、拆去保護柱，看柱壓是否還高，否則是保護柱的問(wèn)題，若柱壓仍高，再檢查2、把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查3、將柱子的進(jìn)出口反過(guò)來(lái)接在儀器上，用10倍柱體積的流動(dòng)相沖洗柱...

液相色譜柱流動(dòng)相的配制和流速的選擇1、流動(dòng)相的配制液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的，因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn)：(1)流動(dòng)相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會(huì )沉淀在柱中(或長(cháng)時(shí)間保留在柱中)。(2)流動(dòng)相與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(3)流動(dòng)相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果；降低柱壓降，延長(cháng)泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度)。(4)流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器，最好使用對紫外吸收較低的溶劑配制...

氣相色譜柱在石油、化工、生物化學(xué)、醫藥衛生、食品工業(yè)、環(huán)保等方面應用很廣。它除用于定量和定性分析外，還能測定樣品在固定相上的分配系數、活度系數、分子量和比表面積等物理化學(xué)常數。氣相色譜柱柱溫的選擇：柱溫是影響分析時(shí)間和分離度的重要因素。選擇柱溫的依據是樣品的沸點(diǎn)范圍，固定液的配比，允許使用溫度，以及檢測器的靈敏度。柱溫主要影響分配系數、容量因子以及組分在流動(dòng)相和固定相中的擴散系數，從而影響分離度和分析時(shí)間。選擇溫柱的原則，一般是在使難分離物質(zhì)對達到要求的分離度條件下，盡可能采...