液相色譜柱流動(dòng)相的配制和流速的選擇

 

1、流動(dòng)相的配制

 

液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的，因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn)：

 

(1) 流動(dòng)相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會(huì )沉淀在柱中(或長(cháng)時(shí)間保留在柱中)。

(2) 流動(dòng)相與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應

(3) 流動(dòng)相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果；降低柱壓降，延長(cháng)泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度)。

(4) 流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器，最好使用對紫外吸收較低的溶劑配制。

(5) 流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導致實(shí)驗無(wú)法進(jìn)行。

(6) 在流動(dòng)相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。

 

2、流動(dòng)相流速的選擇

 

因柱效是柱中流動(dòng)相線(xiàn)性流速的函數，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。對內徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml／min，對于內徑為4.0mm柱，流速0.8ml／min為佳。

 

當選用最佳流速時(shí)，分析時(shí)間可能延長(cháng)?？刹捎酶淖兞鲃?dòng)相的洗滌強度的方法以縮短分析時(shí)間(如使用反相柱時(shí)，可適當增加甲醇或乙腈的含量)。

 

注意：

 

(1) 含水流動(dòng)相最好在實(shí)驗前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動(dòng)相不要過(guò)夜。最好加入*，防止細菌生長(cháng)。

(2) 流動(dòng)相要求使用0.45 μm或0.22μm濾膜過(guò)濾，除去微粒雜質(zhì)。

(3) 使用HPLC級溶劑配制流動(dòng)相，使用合適的流動(dòng)相可延長(cháng)色譜柱的使用壽命，提高柱性能。