離子色譜柱是一種用來(lái)改善在反相色譜中保留較差的強極性物質(zhì)保留行為的色譜技術(shù)。它通過(guò)采用強極性固定性,并且結合高比例有機相/低比例水相組成的流動(dòng)相來(lái)實(shí)現這一目的。而這樣的流動(dòng)相組成尤其有利于提高電噴霧離子化質(zhì)譜的靈敏度。
離子色譜柱的分離機制:
分離機理在目前還存在著(zhù)爭議,主要包括以下三個(gè)方面:
(1)分配機理
(2)離子交換
(3)偶極-偶極相互作用。更多的試驗現象則表明HILIC色譜柱的保留機理包含氫鍵作用、偶極作用和靜電作用等多種次級效應,很難將其區分開(kāi)來(lái)。
影響離子色譜柱保留的主要因素:
普遍認為色譜柱保留行為受到多種參數的影響,如固定相的官能團、有機改性劑的含量、流速、柱溫、流動(dòng)相緩沖體系的pH值、緩沖鹽的種類(lèi)和濃度。
影響樣品在固定相上的保留行為的主要因素都是流動(dòng)相中有機相的比例,例如乙腈的含量的增加會(huì )顯著(zhù)增加樣品的保留因子。在色譜柱分離模式中,溶劑洗脫能力由弱到強為:丙酮<乙腈<異丙醇<乙醇<甲醇<水, 流動(dòng)相中水是較強的洗脫溶劑。一般采用乙腈-水體系作為流動(dòng)相,其中水相的比例為5%-40%以保證其顯著(zhù)的親水作用。將流動(dòng)相中的水相用甲醇、乙醇、異丙醇代替,隨著(zhù)流動(dòng)相極性的減小,待測物在柱上的保留就會(huì )增強。