使用免疫親和柱需要注意哪些地方？

免疫親和柱是利用抗原抗體特異性可逆結合特性的SPE技術(shù)，根據抗原抗體的高選擇性，從復雜的待測樣品中提取目標化合物。

 

免疫親和層析常見(jiàn)的用途是純化重組蛋白。免疫親和層析是從粗混合物中純化蛋白質(zhì)或核酸理想選擇。如果蛋白質(zhì)的分子量，疏水性，電荷等未知，親和色譜法仍可適用于這種情況。一個(gè)典型例子是嘗試分離具有特定活性的酶時(shí)，可以用與所選底物相似或相同的連接配體構建親和柱。

 

免疫親和柱的使用要點(diǎn)：

 

1、上柱的樣品溶液應該保持酸堿中性、無(wú)懸浮物、甲醇濃度不宜過(guò)高；

 

2、若樣品為復雜樣品，例如高蛋白、高油脂、酸性樣品，可以將提取液分兩次提取樣品，可以提高提取效果；

 

3、樣品過(guò)柱及甲醇洗脫速度要慢且均勻，約每秒1-2滴；

 

4、抗原抗體發(fā)生反應的最佳溫度是在25℃左右，實(shí)驗需要的環(huán)境溫度最好是室溫24℃-28℃，太高或太低的溫度都會(huì )對回收率有一定的影響。在使用前需要恢復至室溫再進(jìn)行實(shí)驗；

 

5、不要在無(wú)水狀態(tài)下，瓊脂容易干燥萎縮，影響質(zhì)量；

 

6、儲存條件為4℃-8℃。切記0℃以下的低溫，因為緩沖液凍結，會(huì )嚴重影響親和柱內的物理結構，對質(zhì)量影響很大；

 

7、洗脫一般選擇試劑甲醇，為增強洗脫效果可加大甲醇體積；

 

8、樣液免疫凈化后，洗脫液過(guò)0.45um或更小孔徑濾膜效果更好。