高效液相色譜柱是由柱管、壓帽、卡套(密封環(huán))、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。柱管的材質(zhì)有很多,比如聚合物、玻璃、不銹鋼等。但是建議柱管用不銹鋼材質(zhì),因為不銹鋼這種金屬耐高壓、耐腐蝕且硬度高,相比于玻璃等材質(zhì)不易摔壞。不過(guò)當壓力不高于70Kg/cm2時(shí),也可采用厚壁玻璃或石英管。對于色譜柱柱管內壁要求有很高的光潔度,不銹鋼柱內壁會(huì )經(jīng)過(guò)多次拋光,這是為提高柱效,減小管壁效應。0.1μm高光潔度色譜柱柱管能夠快速分析的同時(shí)保持超高的柱效;使用壽命長(cháng),不僅能夠減少頻繁更換色譜柱帶來(lái)的重新進(jìn)行方法驗證、條件摸索等工作,還大大的降低了使用成本;具備優(yōu)良的選擇性和分離能力。
除了拋光,也有在不銹鋼柱內壁涂敷氟塑料來(lái)提高內壁的光潔度,其效果與拋光是相同的。色譜柱兩端的柱頭內裝有篩板,通常是不銹鋼和peek材質(zhì)制作的,根據需求選擇與色譜柱匹配的柱篩板,孔徑取決于填料粒度,目的是防止填料漏出。
柱內徑一般是根據柱長(cháng)、填料粒徑和折合流速來(lái)確定,目的是為了避免管壁效應。
高效液相色譜柱的柱長(cháng)及內徑的選擇原則是什么?長(cháng)度的選擇:柱越長(cháng),總柱效越高(n值越大),柱越長(cháng),分析時(shí)間也越長(cháng)。250—300mm是普遍的柱長(cháng),實(shí)驗室一半以上的工作都是采用此規格柱子,一般用來(lái)分離l0到50個(gè)組份的中等至復雜混合物;500—600mm,要求較高分辨率的應用,—般用來(lái)分離大于50個(gè)組份或包含有難分離物質(zhì)的復雜樣品程序升溫分析。
內徑:柱效率與柱半徑平方成反比,內徑越小柱效越高,但內徑越大,柱容量也增加,允許進(jìn)樣量就越多。當進(jìn)樣量超過(guò)柱容量時(shí),則因柱內每塊理論板內不能建立真正的平衡,將會(huì )導致色譜峰畸變,柱分辨率降低,重現性不好。因此對于復雜樣品需要準確分離,必須使用小內徑柱子。另一方面若樣品中存在具有很不相同濃度組份化合物,為了增加樣品容量就必須使用內徑大的柱子,目前實(shí)驗室使用常見(jiàn)的柱子內徑一般是4.6mm。
分析大分子量化合物選擇大孔徑高效液相色譜柱;對于高pH值或者堿性化合物需要選擇高封端或者特殊封端的色譜柱,以改善峰形,延長(cháng)色譜柱使用壽命等。色譜柱內徑有2.1、3.0、4.6、10mm可供選擇,不銹鋼材質(zhì)不易因為磕碰損壞柱管。