硅膠色譜柱的使用和儲存說(shuō)明

硅膠因其優(yōu)良的機械強度和表面易改性等特征，已成為應用廣泛的色譜柱填料。硅膠柱具有柱效高、選擇性好及分析速度快等特點(diǎn)，因而被廣泛用于分離極性小分子如藥物，而用于糖、肽或蛋白質(zhì)分離較少。

 

硅膠色譜柱主要是通過(guò)硅膠的硅羥基吸附能力進(jìn)行物質(zhì)的分離，填充顆粒主要是硅膠，所用溶劑常見(jiàn)的是乙酸乙酯，石油醚，不能使用水，對于極性差別比較大的物質(zhì)分離效果好。

 

硅膠色譜柱使用方法：

 

1、稱(chēng)量

200-300目硅膠，稱(chēng)30-70倍于上樣量；如果極難分，也可以用100倍量的硅膠H。干硅膠的視密度在0.4左右，所以要稱(chēng)40g硅膠，用燒杯量100ml也可以。

 

2.攪成勻漿

加入干硅膠體積一倍的溶劑用玻璃棒充分攪拌。如果洗脫劑是石油醚/乙酸乙酯/丙酮體系，就用石油醚拌。

 

3.裝柱

將柱底用棉花塞緊，不*海沙，加入約1/3體積石油醚，裝上蓄液球，打開(kāi)柱下活塞，將勻漿一次傾入蓄液球內。隨著(zhù)沉降，會(huì )有一些硅膠沾在蓄液球內，用石油醚將其沖入柱中。

 

4.壓實(shí)

沉降完成后，加入更多的石油醚，用雙聯(lián)球或氣泵加壓，直至流速恒定。柱床約被壓縮至9/10體積。無(wú)論走常壓柱或加壓柱，都應進(jìn)行這一步，可使分離度提高很多，且可以避免過(guò)柱時(shí)由于柱床產(chǎn)生開(kāi)裂。

 

5.上樣

干法濕法都可以。海沙是沒(méi)必要的。上樣后，加入一些洗脫劑，再將一團脫脂棉塞至接近硅膠表面。然后就可以放心地加入大量洗脫劑，而不會(huì )沖壞硅膠表面。

 

6.過(guò)柱和收集

柱層析實(shí)際上是在擴散和分離之間的權衡。太低的洗脫強度并不好，推薦用梯度洗脫。收集的例子：10mg上樣量，1g硅膠H，0.5ml收一餾分；1-2g上樣量，50g硅膠（200-300目），20-50ml收一餾分。

 

7.檢測

要更多地使用專(zhuān)用噴顯劑，如果僅用紫外燈，會(huì )損失較多產(chǎn)品，紫外的靈敏度一般比噴顯劑低1-2個(gè)數量級。

 

8.送譜

收集的產(chǎn)品旋干，在送譜前通常需要重結晶。如果樣品太少或為液體，可過(guò)一小凝膠柱，作為送譜前的最后純化手段?？沙渥V1.5ppm左右所謂的“硅膠”峰。

 

高純硅膠色譜柱的儲存方法：

 

1、避免用純凈水沖洗鍵合致密的C18柱。

2、防止緩沖溶液和水溶液流動(dòng)相產(chǎn)生微生物，做到流動(dòng)相用多少配多少，或在水流動(dòng)相中加200ppm的疊氮鈉以抑制細菌成長(cháng)或在流動(dòng)相中加20%的有機改性劑，也可抑制微生物生長(cháng)，有機改性劑還有助于流動(dòng)相脫氣。

3、使用緩沖溶液后的產(chǎn)品，應用15～20倍柱體積的不含緩沖劑的同種水—有機溶劑流動(dòng)相沖洗色譜柱，后換成有機溶劑儲存。

4、將兩端用堵頭擰好，以免柱床填料干裂。

5、盡可能將色譜柱貯存于*有機溶劑中，避免在緩沖溶液中保存。