液相色譜(HPLC)是色譜法的一個(gè)重要分支,以液體為流動(dòng)相,采用高壓輸液系統,將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱,在柱內各成分被分離后,進(jìn)入檢測器進(jìn)行檢測,從而實(shí)現對試樣的分析。
液相色譜的特點(diǎn):
1.高壓:液相色譜法以液體為流動(dòng)相(稱(chēng)為載液),液體流經(jīng)色譜柱,受到阻力較大,為了迅速地通過(guò)色譜柱,必須對載液施加高壓。一般可達150~350×105Pa。
2. 高速:流動(dòng)相在柱內的流速較經(jīng)典色譜快得多,一般可達1~10ml/min。液相色譜法所需的分析時(shí)間較之經(jīng)典液相色譜法少得多,一般少于 1h 。
3. :HPLC的分離效率高于普通液相色譜,在發(fā)展過(guò)程中又出現了許多新型固定相,使分離效率大大提高。
4.高靈敏度:液相色譜已廣泛采用高靈敏度的檢測器,進(jìn)一步提高了分析的靈敏度。如熒光檢測器靈敏度可達10-11g。另外,用樣量小,一般微升。
5. 適應范圍寬:氣相色譜法與液相色譜法的比較:氣相色譜法雖具有分離能力好,靈敏度高,分析速度快,操作方便等優(yōu)點(diǎn),但是受技術(shù)條件的限制,沸點(diǎn)太高的物質(zhì)或熱穩定性差的物質(zhì)都難于應用氣相色譜法進(jìn)行分析。而液相色譜法,只要求試樣能制成溶液,而不需要氣化,因此不受試樣揮發(fā)性的限制。對于高沸點(diǎn)、熱穩定性差、相對分子量大(大于 400 以上)的有機物(這些物質(zhì)幾乎占有機物總數的 75% ~ 80% )原則上都可應用液相色譜法來(lái)進(jìn)行分離、分析。 據統計,在已知化合物中,能用氣相色譜分析的約占20%,而能用液相色譜分析的約占70~80%。